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哈佛医学院Y. Shrike Zhang教授课题组 Adv. Mater.: 脱细胞基质生物墨水的快速体积生物打印
2024-01-25  来源:高分子科技

  基于脱细胞基质(dECM)的水凝胶广泛应用于增材生物制造技术。 dECM 的细胞外基质成分和生长因子在细胞粘附、生长和分化中发挥着至关重要的作用。然而,较差的机械性能和打印性仍然是dECM 材料的主要限制。为发挥dECM材料的优势,哈佛医学院Y. Shrike Zhang教授团队将其与体积增材制造(Volumetric Additive ManufacturingVAM)紧密结合起来,开发了基于未修饰的天然的猪心dECM (h-dECM) 和猪半月板dECM (Ms-dECM) 的生物墨水体系。通过VAM旋转投影动态变化的光图案实现的三维物体的快速光聚合,从而将对生物打印水凝胶结构的机械强度要求与打印性分开,允许使用低浓度的 dECM 生物墨水实现复杂形状结构的快速打印。作为示例应用,使用装载大鼠心肌细胞 (rCMs h-dECM体积打印心脏组织,显示出较好的细胞增殖、展开和扩散, 并进一步使用装载人诱导多能干细胞衍生的心肌细胞 hiPSC-CMs h-dECM生物墨水,展示了肌节结构的生成和同步收缩。同时使用装载人间充质干细胞 (hMSCs 的 Ms-dECM生物墨水进行体积打印的半月板结构呈现出较好的软骨分化结果。这项研究为VAM进一步扩展了生物墨水库,并扩大了dECM在组织工程和再生医学中的应用。


1. h-dECM Ms-dECM 生物墨水材料的制备和打印机理


  研究人员从猪的左心室和猪的半月板中分别提取了h-dECMMs-dECM两种材料 (1)。基于两种dECM中富含的络氨酸基团能与Ru/SPS 光引发剂在一定条件下发生光聚合反应的机理,研究人员用不同浓度dECM材料与Ru/SPS按照一定比例混合,测试并优化了其光聚合效率和打印性。同时研究人员发现h-dECM Ms-dECM都可以在1%的低浓度条件下实现VAM复杂结构的快速打印(图2)。


2. h-dECM he Ms-dECM VAM打印性测试和打印结果展示


  为了展示dECM生物墨水的生物打印性和细胞兼容性,研究人员将NIH/3T3 成纤维细胞与两种dECM分别混合并进行VAM体积打印, 并发现在一定的细胞密度内并不会显著影响其打印性。同时,由于dECM提供的良好的微环境,细胞在共培养的14天里展现了很好的细胞增殖、展开和扩散。这个现象进一步在混有rCMsh-dECM生物墨水打印的心脏结构中得到了验证。为了进一步展示dECM-VAM打印体系的优势,研究人员用混有hiPSC-CMsh-dECM生物墨水进行打印,并在第五天观察到嵌入的hiPSC-CMs细胞开始节律性的跳动,同时第十天的免疫染色也验证了相关肌节结构的生成(图3)。


3. dECM-VAM生物打印测试和h-dECM打印结构的部分功能化展示


  最后研究人员也将hMSCs Ms-dECM混合并通过VAM打印了半月板结构。在分化前的14天体外培养中,hMSCs展现了很好的细胞活性,并充分增值,展开和扩散。随后在三周的软骨分化周期内,细胞也持续表达相关的软骨分化基因,证明了该材料体系能提供较好的微环境,让hMSCs进行相关分化活动。并且在五周的体外培养结束后,半月板结构并未发生明显变化,展现了其较好的稳定性。由于天然半月板的有限血管化导致自我再生能力差,这种 VAM 生物打印半月板为半月板移植等相关生物医学应用提供了潜在的可能。


4 Ms-dECM-VAM打印的半月板部分功能化展示


  总结:研究人员成功开发了基于VAM的天然的未经修饰的 dECM(生物)墨水,并证明了通过 VAM快速制造基于水凝胶的组织结构的潜力。通过优化配方,实现了低浓度h-dECM 和 Ms-dECM 复杂结构的打印, 并维持较好的打印保真度。更进一步地,基于 h-dECM 和 Ms-dECM 良好的细胞相容性,对体积生物打印的心脏和半月板结构进行了功能化实验,展示了混合在 h-dECM 打印结构中或在其表面上 rCM 和 hiPSC-CM 的扩散和收缩行为,以及嵌入在 Ms-dECM 半月板结构中的hMSC 的软骨分化。这项工作进一步扩展了VAM的生物墨水库,同时拓宽了基于 dECM 的生物材料在生物医学中的应用。


  相关工作以“Rapid Volumetric Bioprinting of Decellularized Extracellular Matrix Bioinks ”为题发表在Advanced Materials上。通讯作者为哈佛大学医学院Y. Shrike Zhang教授。文章第一作者为哈佛医学院连黎明(现为佐治亚理工大学/埃默里大学在读博士)。论文共同第一作者为广州医科大学谢茂彬教授(香港理工大学博士,哈佛大学博士后(Y. Shrike Zhang教授课题组),广东省杰青),哈佛大学医学院/四川大学华西医院联合培养博士罗泽宇(现四川大学华西医院副研究员)以及哈佛大学医学院研究生张振锐。其他作者还包括哈佛医学院Sushila Maharjan, Xuan Mu, Carlos Ezio Garciamendez-Mijares, Xiao Kuang, Guosheng Tang, Di Wang, Jie Guo, Federico Zertuche González, Victoria Manjarrez, Ling Cai, Xuan Mei,以及塔夫茨大学Jugal SahooGang LiDavid Kaplan教授。


  原文链接https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/adma.202304846


作者简介


  谢茂彬 教授简介:谢茂彬,博士,博士生导师,广州医科大学生物医学工程学院教授,广东省珠江人才计划青年拔尖人才,广东省杰青。2016年博士毕业于香港理工大学,2019-2021年美国哈佛大学医学院博士后。长期从事3D生物打印和生物材料领域研究。发表学术论文33篇,其中以第一/通讯作者身份在Sci. Transl. Med.Nat. Commun.STAR Protoc.Adv. Mater.Adv. Funct. MaterBiomaterials等期刊发表学术论文30余篇。申请发明专利15件,其中PCT专利2件,已授权6件。目前是中国生物医学工程学会会员、广东省生物医学工程学会生物医用材料与临床应用分会委员。同时担任Adv. SciACS NanoSmallAppl. Mater. TodayNanoscale等国际著名学术期刊审稿人


  罗泽宇 副研究员简介: 罗泽宇,四川大学华西临床医学院&哈佛大学联合培养博士,分别师从周宗科教授和Y. Shrike Zhang教授。研究内容主要涉及3D生物打印、微流控技术、骨与软组织工程等研究领域。截止目前,在Adv. Mater.PNASNat. Commun.MatterAdv. Function. Mater.SmallAdv. Health. Mater.等国际权威期刊上发表三大检索收录论文40余篇。论文被引用超过1000余次。2篇文章入选全球Top 1% ESI高被引论文。主持国家自然科学基金、博新计划等高水平基金项目。

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(责任编辑:xu)
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