本发明公开了一种含手性侧基的温敏性微凝胶及其制备方法。所述微凝胶含有具有手性侧基的酰胺类单体M1、化学交联剂M2和具有温度敏感性的烷基丙烯酰胺类单体M3，三者用量的质量百分比为：1~18%：2~15%：97~80%。本制备方法是先制备手性单体M1，然后在无氧条件下将M1、M2和M3溶于四氢呋喃或氯仿进行自由基共聚反应，乙醚沉淀旋转蒸发后得到具有温敏性和手性分子识别能力的微凝胶。该制备方法简单易控、可再生、环境友好，微凝胶的温敏性和手性分离效率可通过改变温度、投料比、交联剂用量和原料来调节，可用于生物分离等领域。